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動(dòng)物細胞融合的方法
日期:2025-04-19 20:24
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摘要:
在體外培養條件下,動(dòng)物細胞會(huì )自發(fā)融合,但是頻率極低。因此,一般都需要添加具有誘導細胞融合效應的生物或化學(xué)藥劑,或者采用電融合技術(shù),人為地促進(jìn)細胞融合。
病毒誘導融合 病毒是*早采用的融合劑。常用于誘導動(dòng)物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙臺病毒*常用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線(xiàn)或β-丙內酯滅活,使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。
用滅活的仙臺病毒誘導細胞融合的
優(yōu)點(diǎn):融合率較高,對各種動(dòng)物細胞都適宜,且仙臺病毒能在雞胚中大量繁殖,容易培養;
缺點(diǎn):仙臺病毒不穩定,在保存過(guò)程中融合活性會(huì )降低,并且制備過(guò)程比較煩瑣。此外,病毒引進(jìn)細胞后,可能會(huì )對細胞的生命活動(dòng)產(chǎn)生干擾。
聚乙二醇PEG誘導融合 聚乙二醇PEG具有強烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白質(zhì)的作用,能夠有效地促進(jìn)植物原生質(zhì)體和動(dòng)物細胞的融合。在不同種類(lèi)的動(dòng)物細胞混合液中加入聚乙二醇,就會(huì )發(fā)生細胞凝集作用;在稀釋和除去聚乙二醇的過(guò)程中,就會(huì )發(fā)生細胞融合。聚乙二醇誘導細胞融合的機理,目前還不太清楚。聚乙二醇是化學(xué)試劑,使用起來(lái)很方便,誘導細胞融合的頻率比較高,但是它有一定毒性,對有些細胞(如卵細胞)不適用。
細胞融合法 20世紀80年代建立起來(lái)的細胞融合技術(shù),是將兩種細胞的混合液置于低壓交流電場(chǎng)中,使細胞聚集成串珠狀,然后施加高壓電脈沖,以促使細胞融合。緊密排列的細胞,在相互接觸的細胞膜之間會(huì )出現無(wú)蛋白顆粒的脂質(zhì)區,當受到電擊時(shí),這個(gè)區域就會(huì )被擊穿,產(chǎn)生脂雙層膜孔,導致細胞之間的細胞質(zhì)連通,進(jìn)而發(fā)生細胞融合。細胞融合技術(shù)有許多優(yōu)點(diǎn),如誘導細胞融合的頻率高,對細胞無(wú)毒害作用,操作簡(jiǎn)便,可重復性好。
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